DWD-1 UV-detektor (högpresterande dubbla strålar med dubbla våglängder) Inbyggd databehandling

Våglängdsområde: 254nm, 280nm (samtidig detektion), och två valfria våglängder mellan 254nm, 280nm-400nm spektralinjer samtidigt detekteras.

* DWD-1 instrument egenskaper

Protein 280nm/254nm dubbel våglängd mätning:

Proteinmolekylerna innehåller konjugerade dubbelbindningar av aromatiska aminosyror som tyrosin och trysin. De har egenskapen att absorbera ultraviolett ljus, dess absorptionstopp på 280 nm våglängd, och absorptionstoppens optiska densitetsvärde inom denna våglängd är proportionellt till dess koncentration, kan därför användas som grund för proteinkvaliteten och kvantitativ mätning, därför används den ultravioletta absorptionsmetoden på 280nm oftast för kontinuerlig övervakning av proteinkoncentrationen i stratifieringssystemet. Men eftersom olika proteiner har olika innehåll av tyron och trysin, måste det vara nödvändigt att jämföra det rena proteinet som standard för att bestämma exakta mängder, eller redan känna till dess lysdämpningsfaktor som referens. Dessutom har många icke-proteinämnen också en bestämd absorptionsförmåga vid 280 nm våglängd, vilket kan förekomma störningar. Dessa är särskilt allvarligare av nukleinsyror (puriner och pyriminer). Absorptionen vid 280 nm är 10 gånger starkare (per gram) än proteinet, men nukleinsyra absorberas starkare vid 254 nm, med sin absorptionstopp nära 254 nm. Nukleinsyrans lysdämpningsfaktor vid 254 nm är dubbelt så stor som vid 280 nm.

Protein är tvärtom, 280nm ultraviolett absorption är större än absorptionsvärdet för 254nm.

Vanligtvis：

Ljusabsorptionsförhållande för rent protein: A280/A254" 1,8

Ljusabsorptionsförhållande för ren nukleinsyra: A280/A254 0,5

Därför, när nukleinsyra samtidigt finns i proteinlösningen (vilket är fallet i de flesta biologiska system), måste OD254nm mätas samtidigt med OD280nm. Den verkliga proteinmängden beräknas sedan med hjälp av en empirisk formel, baserat på förhållandet mellan absorptionen av båda våglängderna, för att eliminera effekten av nukleinsyra.

Proteinkoncentration = 1,45 x A280 – 0,74 x A254 (mg/ml)

Denna empiriska formel är upprättad med hjälp av data som mäts av en blandning av proteiner (jäst enololase) och nukleosyra (jäst nukleosyra) i kända olika koncentrationer.